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    WB常用試劑的參照說明書

    更新時(shí)間:2017-06-06      點(diǎn)擊次數(shù):3258
      WB常用試劑使用可逆染色劑例如麗春紅S檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果,檢查轉(zhuǎn)膜操作是否正確。PVDF膜需預(yù)先浸在甲醇中,然后浸到轉(zhuǎn)移緩沖液中。代替5%脫脂奶粉,使用含0.5%脫脂奶粉或無脫脂奶粉的抗體稀釋液,或更換封閉劑,減少封閉時(shí)間。使用新鮮一抗,重復(fù)使用有效濃度會(huì)降低。在孵育和洗滌液中加入溫和去污劑如吐溫-20。脫脂奶粉含有酪蛋白,該蛋白本身就是一種磷酸化蛋白,會(huì)結(jié)合磷酸化特異性抗體而易產(chǎn)生高背景。使用BSA代替奶粉作為封閉劑。
      WB常用試劑使用溫和的去污劑如吐溫-20,或更換封閉劑(常用的脫脂奶粉、BSA、血清或明膠)。參照說明書,比對(duì)免疫原序列和蛋白序列以確??贵w和目的蛋白會(huì)發(fā)生反應(yīng),設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照。每泳道蛋白上樣量不低于20-30μg,使用蛋白酶抑制劑并設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照。參照凝膠的配方,在凝膠中加入適量TEMED,放置時(shí)在凝膠頂部加入適量0.1%SDS(水稀釋)以防凝膠變干。
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