血清常見(jiàn)問(wèn)題解答

血清小知識(shí)

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，而且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。

胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品質(zhì)zui高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分zui少。

保存血清的方法

長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃或-80℃低溫冰箱中，由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽?。多?shù)情況下一瓶500ml的血清不能夠一次使用完畢，所以建議一次性將血清分裝成一次性能夠使用完畢的體積（如50ml）。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。

如何解凍血清

我們建議血清在2-8℃的冰箱過(guò)夜溶解，在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。瓶裝血清解凍應(yīng)采用逐步解凍法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天；然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。

血清中如果出現(xiàn)沉淀

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。

若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。不要以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。

血清的熱滅活

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞（ES）細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

熱滅活一般是56℃、30分鐘加熱已*解凍的血清，加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。

除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多。

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