mIHC多色技術(shù)在三級淋巴結(jié)構(gòu)TLS研究中的應(yīng)用分享

三級淋巴結(jié)構(gòu)TLS示意圖，圖片來源于自網(wǎng)絡(luò) 

本文研究了在G1/G2期非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中三級淋巴結(jié)構(gòu)TLS的分布、細(xì)胞組成、與腫瘤浸潤免疫細(xì)胞的相關(guān)性以及預(yù)后價值。其主要方法就是對取自兩個隊列的患者腫瘤組織樣本進(jìn)行HE染色、IHC及mIHC染色分析。 
研究發(fā)現(xiàn)超過1/ 3的G1/G2期非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤樣本中發(fā)現(xiàn)了TLS，且位于瘤周、腫瘤組織外沿或間質(zhì)區(qū)。TLS主要由帶有生發(fā)中心的B細(xì)胞濾泡和帶有樹突狀細(xì)胞的T細(xì)胞區(qū)組成。Kaplan-Meier分析顯示，TLS的存在與更長的無復(fù)發(fā)生存期(RFS, p＜0.001)和總生存期(OS, p=0.001)相關(guān)，而TLS的數(shù)量則沒有預(yù)后意義。 

三級淋巴結(jié)構(gòu)TLS的IHC及組織學(xué)情況 
 

如上圖所示，研究者首先用常規(guī)IHC方法鑒定了TLS中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD20+B細(xì)胞、CD11c+DCs、CD45RO+記憶性T細(xì)胞、NCR1+的NK細(xì)胞、FOXP3+Tregs和CD68+的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞TAMs；進(jìn)而根據(jù)IHC的結(jié)果，選擇對TLS中作為主要組成的CD45RO+記憶性T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD20+B細(xì)胞進(jìn)行mIHC多色共定位，結(jié)果如下圖所示，深入定量分析可知TLS中占比較多的是39.35%的CD45RO+記憶性T細(xì)胞，然后是36.61%的CD20+B細(xì)胞、20.05%的CD4+T細(xì)胞以及3.99%的CD8+T細(xì)胞。

非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤樣本的mIHC多色結(jié)果
 

后續(xù)的研究，研究者探討了TLS存在與否和兩組隊列樣本無復(fù)發(fā)生存期RFS及總生存期OS的關(guān)系，結(jié)果如下圖所示，TLS顯著提升了兩組隊列RFS和OS值。

Association of the presence of TLS with RFS and OS in the Fudan cohort (A,B) and external validation set (C,D).
 

本文研究人員認(rèn)為三級淋巴結(jié)構(gòu)TLS在G1/G2期非功能性胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中表征了一個免疫應(yīng)答微環(huán)境，并且有潛力成為分析RFS和OS的一個獨立預(yù)后因素。 
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