介紹蛋白酶K的使用方法

　　蛋白酶K(ProteinaseK)，來源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber）的蛋白酶K基因，屬于絲氨酸蛋白酶類，具有*的酶活性和廣泛的底物特異性。

　　蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的樣品處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，能增加探針與靶核酸結(jié)合的機會，提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導致組織切片的脫落，細胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達到理想的染色效果。

　　介紹蛋白酶K的使用方法：

　　1.配制蛋白酶K溶液：一般以20mg/ml濃度配制蛋白酶K溶液。將200mg的蛋白酶K加入到9.5mldd水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

　　2.根據(jù)終濃度50—100µg/ml，吸取適量蛋白酶K溶液，到待消化樣品中，孵育溫度為55至65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時；理想孵育時間為2小時。推薦反應緩沖液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2。