WB——預(yù)制膠簡(jiǎn)介

蛋白電泳中*的一環(huán)就是配膠，常規(guī)配膠往往需要耗費(fèi)數(shù)個(gè)小時(shí)的時(shí)間，還要面臨漏液、凝膠不均勻（微笑線）、氣泡（皺眉線）等等問(wèn)題，甚至有時(shí)候?yàn)榱酥苽湟粔K膠以獲得一張好看的電泳圖片，要多耗費(fèi)幾天的時(shí)間；除了配制麻煩，原料試劑還有毒性，會(huì)對(duì)對(duì)配膠人員的身體造成危害。預(yù)制膠的出現(xiàn)，正是為了解決自己配膠存在的種種麻煩。

 微笑線和皺眉線

固定膠or梯度膠？

8%、10%、12%、4-12%、4-20%......這其實(shí)指的是聚丙烯酰胺的濃度，不同濃度意味著對(duì)分離的蛋白分子量范圍的限制。前三者指的是固定濃度的預(yù)制膠，而后面二者則是梯度膠。
凝膠梯度是通過(guò)梯度混合器形成的，高濃度的丙烯酰胺溶液首先加入到玻璃平板中，而后溶液濃度呈梯度下降，因此在凝膠的頂部孔徑較大，而在凝膠的底部孔徑較小。固定膠只能分離其分離范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)，過(guò)大過(guò)小都不行，而梯度膠則不存在這種局限性，大分子在頂部分離，小分子在底部分離；由于梯度凝膠孔徑逐步變小，在蛋白質(zhì)不能通透的孔徑附近對(duì)蛋白有濃縮作用，所以電泳后形成很窄的區(qū)帶，可以分辨出分子量相差較小的蛋白質(zhì)，而這類蛋白往往在固定膠無(wú)法完成分離。

Absin BIS-Tris Gels預(yù)制膠優(yōu)勢(shì)：

▲ BIS-Tris Gels是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝膠，相比于傳統(tǒng)的Tris-Gly凝膠，Bis-Tris凝膠偏酸性，不容易降解，在4-25℃的條件下能夠長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存
▲ 不含SDS，根據(jù)使用的電泳緩沖液類型可進(jìn)行變性或非變性電泳實(shí)驗(yàn)
▲ 含有1.5厘米高的4%濃縮膠，可以有效確保獲得非常銳利的條帶
▲ 膠板印有孔道標(biāo)識(shí)，加樣更方便
▲ 電泳時(shí)間短，可支持150V電壓，30-45min即可完成電泳過(guò)程
▲ 邊緣效應(yīng)弱，條帶更平直；相對(duì)于Tris-Glycine體系，Bis-Tris體系凝膠條帶位置正確性更高。
▲ 不用自行配制，開(kāi)袋即用，安全省事便捷
▲ 避免丙烯酰胺毒害實(shí)驗(yàn)人員可能性
▲ 批量生產(chǎn)，膠與膠間重復(fù)性好，質(zhì)量穩(wěn)定，避免手工灌膠的差異性

預(yù)制膠Q&A：

Q：在使用過(guò)程中有哪些需要注意的地方？
W：必須使用配套的MOPS/MES緩沖液，若使用其他體系的緩沖液，會(huì)造成條帶異常（本品贈(zèng)送20×MOPS電泳液）
Q：變性膠和非變性膠的區(qū)別是什么？
W：變性膠與非變性的凝膠成分是一樣的，均不含SDS，兩者的區(qū)別在于變性膠的running buffer中含SDS, 而非變性膠的running buffer不含SDS，老師可以根據(jù)自己的需求配制變性或非變性的running buffer。
Q：電泳時(shí)，分子量較小的marker和條帶分不開(kāi)怎么辦？
W：這個(gè)問(wèn)題的原因是分離膠濃度較低造成的，不同濃度的分離膠分離范圍不同（見(jiàn)下圖），選用較高濃度的分離膠有助于小分子量條帶更加分散，便于觀察。

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