細(xì)胞培養(yǎng)小分子藥物配制方法解析

科研實(shí)驗(yàn)中我們經(jīng)常需要配制各種濃度的試劑。例如細(xì)胞實(shí)驗(yàn)一般需要加入小分子激動(dòng)劑/抑制劑；分子轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)一般會(huì)加入抗生素；免疫實(shí)驗(yàn)需要加入免疫刺激物/免疫佐劑等。這些昂貴的試劑濃度一旦計(jì)算錯(cuò)誤，不僅挑燈夜戰(zhàn)得來(lái)的數(shù)據(jù)毀于一旦，早日發(fā)文的愿望也隨之破滅，可謂一失足成千古恨。今天小愛(ài)就為大家解決這一難題，讓我們學(xué)會(huì)快速換算試劑濃度，擺脫科研失誤。

我們買(mǎi)來(lái)的小分子抑制劑一般是凍干粉，需要把它配制成溶液。首先，我們應(yīng)該知道藥物的分子量、溶解度以及規(guī)格。如果是毫克級(jí)小包裝，一般不需要稱量分裝，直接在原瓶中溶解配成儲(chǔ)存液。

以ROCK抑制劑Y-27632為例，產(chǎn)品信息如下：

該藥物推薦溶劑DMSO，同時(shí)，最大只能配成129.38mM的儲(chǔ)存液。這一點(diǎn)非常重要。有些人沒(méi)有注意藥物溶解性，直接在非水溶性藥物中加入PBS配置，結(jié)果藥物不溶，“損失慘重"。

假如我們需要配置10mM儲(chǔ)存液，計(jì)算公式如下：

  質(zhì)量（mg）= 濃度（mM）x 體積（L）x 分子量  （1）
5（mg）= 10（mM）x ?（L）x 247.34

即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO，即可配制成10mM溶液。（注：此處要預(yù)估原瓶的容量，如果原瓶容量小于2 mL，應(yīng)考慮配置更大濃度的儲(chǔ)存液，如20mM，加入1.01 mL DMSO）。

此外，我們也會(huì)經(jīng)常遇到質(zhì)量濃度和摩爾濃度單位轉(zhuǎn)換，同樣以10mM Y-27632為例：

10mM=10mmol/L，化合物分子量為247.34，即247.34g/mol=247.34mg/mmol

10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL

即10mM Y-27632溶液相當(dāng)于2.4734mg/mL

濃度快速換算法則：

1）mM轉(zhuǎn)換mg/mL，摩爾濃度數(shù)值乘以分子量再除以1000；

2）mg/mL轉(zhuǎn)換mM，質(zhì)量濃度數(shù)值除以分子量再乘以1000。

我們買(mǎi)來(lái)抑制劑的凍干粉，配制儲(chǔ)存液的濃度為10mM，如果需要使用終濃度為25uM進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，需要加入多少抑制劑儲(chǔ)存液呢？記住下面這個(gè)稀釋公式就可以了：

起始濃度 x 起始體積 = 最終濃度 x 最終體積

  C1（mM） x V1（mL）= C2（mM）x V2（mL） （2）

首先，

注意單位，我們假設(shè)最終體積為2mL，代入公式：

10（mM）x V1（mL）= 0.025（mM）x 2（mL）

即我們需要吸取5uL的儲(chǔ)存液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

我們?cè)谑褂枚蛱K糖醇(DTT)做實(shí)驗(yàn)時(shí)，會(huì)遇到這樣的問(wèn)題：已發(fā)表的文獻(xiàn)中使用0.1%的DTT溶液，而你購(gòu)買(mǎi)的DTT為1mol/L的儲(chǔ)存液，那么這該如何換算呢？請(qǐng)聽(tīng)小愛(ài)為您解答：

DTT的分子量為154，即154g/mol，儲(chǔ)存液換算成質(zhì)量濃度C1為

154g/mol x 1mol/L = 154g/L

假設(shè)需配制1L的0.1%DTT溶液，即V2 = 1L = 1000mL

0.1% DTT溶液為0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L，即C2 = 1g/L

再使用公式（2）C1 x V1 = C2 x V2 可得：

154（g/L）x V1（L）= 1（g/L）x 1（L）

V1 = 6.5mL，即吸取6.5mL 1mol/L的DTT儲(chǔ)存液，加入993.5mL稀釋液中即可獲得0.1%的DTT溶液。

如果我們購(gòu)買(mǎi)的是固體二硫蘇糖醇，配制0.1%的DTT溶液方法如下：精確稱取1g二硫蘇糖醇，用水定容至1000mL即可。

DL-二硫蘇糖醇應(yīng)用：

※ 作為牛奶中主要過(guò)敏原αs1-酪蛋白的還原和烷基化反應(yīng)物之一；

※ 作為精子去膜和再激活培養(yǎng)基的一個(gè)組分；

※ 因硫醇可有效保護(hù)生物催化劑的活性位點(diǎn)而維持酶的穩(wěn)定性；

※ 作為還原劑用于測(cè)試N-乙基馬來(lái)酰亞胺與巰基反應(yīng)的特異性。

產(chǎn)品信息：

小分子抑制劑產(chǎn)品推薦：

溫馨提示：Absin所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究，請(qǐng)勿藥物、家用或其他用途。

Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動(dòng)劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...