馬血清給特別滴細(xì)胞特別滴“愛”

大家都知道，胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)界的“香餑餑"，備受胞胞們的“寵愛"，其實還有一個“香煎餅"，大家可知道？對一些“挑食"的細(xì)胞，馬血清可謂是散發(fā)著一股“煎餅的清香"。

圖1 馬血清優(yōu)級（abs989）

一、馬血清的第一大功能是“滋養(yǎng)"一些特別的細(xì)胞，如免疫細(xì)胞類、成纖維細(xì)胞類、上皮細(xì)胞類、神經(jīng)細(xì)胞類等。需要添加馬血清的常見細(xì)胞類型如下：

1）NK（人外周血自然殺傷細(xì)胞）和NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞）

營養(yǎng)體系：74% α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（abs9506）＋ 0.2mM Inositol（abs816057）＋ 0.1mM β-mercaptoethanol（abs9592）＋ 0.02mM Folic Acid（abs812845）＋ 100-200U/mL recombinant IL-2（abs04045）+ 12.5 %馬血清優(yōu)級（abs989）+ 12.5% 胎牛血清優(yōu)級（abs972）+ 1% 雙抗（abs9244）

2）EL-4（小鼠胸腺淋巴瘤細(xì)胞）

營養(yǎng)體系：89% DMEM高糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基（abs9483）+ 10% 馬血清優(yōu)級（abs989）+ 1% 雙抗（abs9244）

3）L929（小鼠成纖維細(xì)胞）和CRFK（貓腎細(xì)胞）

營養(yǎng)體系：89% MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基（abs9503）+ 10% 馬血清優(yōu)級（abs989）+ 1% 雙抗（abs9244）

4）MCF 10A（人正常乳腺上皮細(xì)胞）

營養(yǎng)體系：94% DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基（abs9561）+ 5% 馬血清（abs989）+ 1% 雙抗（abs9244）+ 20ng/ml EGF（abs04176）+ 0.5ug/ml 氫化可的松Hydrocortisone（abs814512）+ 100ng/ml 霍亂霉素choleratoxin+10ug/ml 胰島素insulin（abs42225219）

5）PC-12（Undifferentiated）（大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞（未分化））

營養(yǎng)體系：79% RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基（abs9484）+ 15% 馬血清（abs989）+ 5% 胎牛血清優(yōu)級（abs972）+ 1% 雙抗（abs9244）

二、馬血清第二大功能是誘導(dǎo)分化作用，有文獻報道^【1】馬血清在 5-氮雜胞苷誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞成肌細(xì)胞實驗中發(fā)揮重要作用。

該研究如下：將第1代長滿100 mm培養(yǎng)皿的脂肪干細(xì)胞傳代至3個6孔板，實驗組培養(yǎng)基中加入體積分?jǐn)?shù)為 5% 馬血清 +10 μmol/L 5-氮雜胞苷；對照組培養(yǎng)基中單純添加 10 μmol/L 的 5-氮雜胞苷；空白組為單純低糖 DMEM 培養(yǎng)基，其余培養(yǎng)、傳代及鑒定所需的條件相同。每日光鏡觀察記錄形態(tài)，在培養(yǎng)的第 7、14、28、35 天行免疫熒光和流式細(xì)胞儀檢測肌蛋白表達(dá)差異。

該文獻的結(jié)果與結(jié)論是免疫熒光檢測成肌特異性胞質(zhì)蛋白表達(dá)以及流式細(xì)胞檢測相應(yīng)蛋白表達(dá)率提示，加入馬血清后的實驗組脂肪干細(xì)胞的成肌速度和誘導(dǎo)成肌所需時間明顯比單純加入 5-氮雜胞苷的對照組更有優(yōu)勢。實驗初步表明馬血清在促進脂肪干細(xì)胞誘導(dǎo)成肌方面起著縮短誘導(dǎo)成肌所需時間的作用。

同時，馬血清在誘導(dǎo) C2C12（小鼠成肌細(xì)胞）分化為多核肌管方面也發(fā)揮重大作用。C2C12 細(xì)胞是由 D·Yaffe 和 O·Saxel 建立的小鼠成肌細(xì)胞株的亞克??；該細(xì)胞分化很快，形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白。將狀態(tài)良好的骨骼肌細(xì)胞以 0.9×10⁵ 接種在96孔板上（每孔100ul），置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h 后，待細(xì)胞融合到 70-80% 后，更換成的含有 2% 馬血清的培養(yǎng)基中，進行誘導(dǎo)分化。（如圖2所示）

圖3 C2C12（小鼠成肌細(xì)胞）向多核肌管方向分化

另外，也有文獻報道^【2】傳代培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（P3）在 20% 馬血清的 L-DMEM 培養(yǎng)液中可分化為脂肪細(xì)胞。

此外， 10% 馬血清可代替 FBS 用于支持綿羊紅細(xì)胞的體外抗體應(yīng)答； 血清 IgG 制備，白蛋白的提取及生物活性研究；免疫組化（IHC）、酶聯(lián)免疫（ELISA）等免疫實驗的封閉劑。

【1】劉杰,傅強.馬血清在脂肪干細(xì)胞成肌誘導(dǎo)中的作用[J].中國組織工程研究, 15(14)

【2】趙文靜,陳亞潔,劉薇.人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志.2006.16(18):2744-2747


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