工具篇 | mRNA標準品應(yīng)用案例展示

背景介紹：

疫情mRNA疫苗的成功開發(fā)使得mRNA技術(shù)得到重要的關(guān)注。mRNA技術(shù)作為一種通用性技術(shù)，其研發(fā)路徑和生產(chǎn)工藝顯著區(qū)別于傳統(tǒng)的生物醫(yī)藥研發(fā)模式，有望在傳染病疫苗、腫瘤疫苗、免疫治療、蛋白替代療法、治療性抗體等多個領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，是醫(yī)藥研發(fā)進入新紀元。

在對于核酸藥物遞送系統(tǒng)研究、蛋白表達的療效研究以及mRNA藥物研發(fā)中工具mRNA起到非常重要作用，那么大家知道什么是工具mRNA，它的作用是什么呢？

什么是工具mRNA？

工具mRNA（mRNA標準品）即成品的標準型信使核糖核酸（類似于大家分子實驗中常用的成品質(zhì)粒）。用戶購買后無需對mRNA標準品進行任何處理，可直接應(yīng)用于相應(yīng)實驗。

愛必信擁有一系列的線性、環(huán)狀工具mRNA。其中線性mRNA采用化化學(xué)合成的Cap1帽結(jié)構(gòu)，使線性mRNA具有高比例的天然帽子結(jié)構(gòu)，修飾堿基 (N1-Methylpseudo-UTP、Pseudo-UTP、5-Methoxy-UTP、5-Methyl-CTP、N6-Methyl-ATP) 有5種可供選擇，同時使用優(yōu)化了適用于哺乳動物細胞的密碼子、UTR、polyA結(jié)構(gòu)。環(huán)狀mRNA通過體外轉(zhuǎn)錄生成并環(huán)化，繼而分離純化得到成品。

工具mRNA分類：

1、報告基因類

報告基因類mRNA常用于細胞轉(zhuǎn)染、翻譯效率、藥物遞送、體內(nèi)成像等研究。其中愛必信EGFP mRNA是一種常用的示蹤蛋白mRNA，熒光穩(wěn)定性強，用于表達加強的綠色熒光蛋白（分離自水母），發(fā)射波長為509nm，可通過熒光顯微鏡或者流式細胞術(shù)檢測，是觀察mRNA遞送、翻譯的理想工具。

圖 EGFP mRNA Agarose電泳條帶

圖 HEK293細胞轉(zhuǎn)染EGFP mRNA 24h后表達效果

愛必信還擁有其他報告基因類工具mRNA如tdTomato mRNA、YFP mRNA、mBanana mRNA等熒光蛋白mRNA，可用于對照驗證實驗，大家如有需要歡迎來詢。

2、基因編輯類

CRISPR/Cas9是*基因編輯系統(tǒng)，被廣泛用于治療各類疾病。Cas9 mRNA可在細胞內(nèi)瞬時表達Cas9蛋白，能減少免疫反應(yīng)和脫靶風(fēng)險。

3、免疫抗原類

免疫抗原類mRNA是腫瘤免疫療法的理想研究工具。卵白蛋白 (OVA) 是絲狀蛋白超家族的一員，是在蛋清中發(fā)現(xiàn)的主要糖蛋白。是一種常用的免疫和生化研究抗原，是一種已建立的氣道高反應(yīng)性模型過敏原，可激活細胞免疫和體液免疫。

4、蛋白替代類

EPO mRNA用于表達人源EPO蛋白 (human erythropoietin) 。我們使用 (Abs CapTM) 在體外轉(zhuǎn)錄生產(chǎn)了EPO mRNA，化學(xué)合成的Cap1結(jié)構(gòu)使其具有高比例的天然的mRNA帽子結(jié)構(gòu)，從而獲得高效的表達效果。

工具mRNA產(chǎn)品特征：

工具mRNA產(chǎn)品優(yōu)勢：

1、Cap1型帽結(jié)構(gòu)，提高mRNA穩(wěn)定性及翻譯效率，更適合哺乳動物；
2、5種修飾可供選擇，加入修飾堿基可提高翻譯效率，降低免疫原性；
3、合適的PolyA尾結(jié)構(gòu)，保證mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率；
4、完整性高，質(zhì)控嚴格，方便研究和應(yīng)用。

用戶實驗案例1：

用核酸轉(zhuǎn)染試劑盒(abs60259)轉(zhuǎn)染mCherry mRNA至HEK293細胞24h、48h，在熒光顯微鏡下觀察到的紅色熒光穩(wěn)定且信號強。（具體實驗操作可參考核酸轉(zhuǎn)染試劑盒(abs60259)實驗操作步驟）

圖 轉(zhuǎn)染mCherry mRNA 24h后的熒光

圖 轉(zhuǎn)染mCherry mRNA 48h后的熒光

用戶實驗案例2

用mRNA轉(zhuǎn)染試劑(abs60339)在不同類型細胞中轉(zhuǎn)染線性工具mRNA—EGFP mRNA，處理細胞24h后利用熒光顯微鏡拍照，各種細胞都呈現(xiàn)較強的綠色熒光。

圖 轉(zhuǎn)染EGFP mRNA于不同類型細胞中

用戶實驗案例3

注射線性Luciferase mRNA至活體小鼠體內(nèi)，小鼠體重150ug，每針注射20uL，共計3針，3天后進行活體成像。

圖 Luciferase mRNA注射小鼠后活體成像

FAQ：

1、工具mRNA保存條件是什么？

A：需要低于-40°C保存，-80℃冰箱或液氮保存都可以，愛必信所提供的均為新鮮生產(chǎn)的產(chǎn)品，為了達到最佳使用效果，請在收到貨物的2個月內(nèi)使用。若不小心將mRNA短期（例如1天）存放于-20℃，可以在正式實驗之前將mRNA跑瓊脂糖凝膠電泳看其是否降解。

2、工具mRNA是什么狀態(tài)？

A：我司的工具mRNA是液體狀態(tài)，通用溶劑一般是1mM檸檬酸鈉鹽溶液，pH為6.4。

3、工具mRNA的貨期有多久？

A：我公司工具mRNA均為新鮮生產(chǎn)產(chǎn)品，我們收到訂單后會立即安排生產(chǎn)、發(fā)貨。一般貨期為1-2周。

4、工具mRNA的純度能達到多少？

A：線性mRNA可達到90%的純度；環(huán)狀mRNA如果長度是3-5k，可達到科研級別純度，通常能達到85%的純度。環(huán)狀mRNA序列越長，關(guān)環(huán)效率越低，純化難度越高。

5、工具mRNA推薦的帽結(jié)構(gòu)是哪一種？

A：Cap1 AG。加帽率高達95%。

6、我所需要的工具mRNA在沒有找到，怎么辦？

A：目前市面上常規(guī)的mRNA標注品類目我公司都是有的。若我司的工具mRNA類別中沒有您所需的mRNA，您可以選擇我公司的定制合成服務(wù)，我們?yōu)槟O(shè)計合成特定的mRNA。

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Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...