THP-1分化成巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)攻略

概述

巨噬細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，在保護(hù)機(jī)體免受感染和維持組織平衡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。為了研究巨噬細(xì)胞的功能和機(jī)制，科學(xué)家們創(chuàng)造了一種不需要從患者或動(dòng)物采集組織的模型，即THP-1細(xì)胞。THP-1細(xì)胞系最初來自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，屬于懸浮細(xì)胞，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力，成為巨噬細(xì)胞分化的好選擇。THP-1細(xì)胞可通過化學(xué)物質(zhì)處理、細(xì)胞因子刺激或共培養(yǎng)等方法，誘導(dǎo)其分化為具有巨噬細(xì)胞特性的細(xì)胞群。

機(jī)理

細(xì)胞因子刺激是一種常見的THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化方法。IL-4和IL-13等細(xì)胞因子能夠促使THP-1細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞，并啟動(dòng)特定的信號(hào)通路，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞功能。這種方法可以模擬體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)過程，并提供一種便捷的方式來研究巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等方面的功能。

巨噬細(xì)胞被分為兩種主要類型：M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞。THP-1細(xì)胞通常用佛波酯(PMA)(abs9107)誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，然后在PMA仍然存在的情況下：

加入脂多糖(LPS)(誘導(dǎo)濃度：100ng/mL)(abs47014848)、IFN-γ(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)(abs04123)培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M1極化；

加入IL-4(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)(abs04698)、IL-13(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)(abs04079)培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M2極化；

最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，可保持72h。

誘導(dǎo)步驟

THP-1誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)：更多培養(yǎng)技巧可查看THP-1細(xì)胞培養(yǎng)攻略

THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）細(xì)胞基本信息

THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導(dǎo)濃度：100ng/mL）制成誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

（3）接種細(xì)胞：收集THP-1細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)，用誘導(dǎo)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀調(diào)整細(xì)胞密度為5*10^5/mL，將細(xì)胞種入六孔板，每孔加入細(xì)胞懸液2mL；

（4）誘導(dǎo)培養(yǎng)：48h后，顯微鏡下觀察巨噬細(xì)胞構(gòu)建成功；

（5）誘導(dǎo)成功的標(biāo)志：單核細(xì)胞THP-1用PMA誘導(dǎo)后，由懸浮式生長變成貼壁生長，由圓形變成不規(guī)則形態(tài)，體積進(jìn)一步增大，細(xì)胞漿疏松，細(xì)胞核增大明顯，可見大量明顯細(xì)胞器，胞膜周圍可見少量突起。

PMA誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞培養(yǎng)的相差顯微照片

用PMA孵育THP-1細(xì)胞48h，顯示THP-1(40X)在(A)誘導(dǎo)前(B)誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)變化。它們的形態(tài)由圓形變?yōu)榧?xì)長和扁平。

巨噬細(xì)胞進(jìn)一步誘導(dǎo)成M1型實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導(dǎo)濃度：100ng/mL）、脂多糖(LPS)(誘導(dǎo)濃度：100ng/mL)(abs47014848)、IFN-γ(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)（abs04123），制成誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將已經(jīng)誘導(dǎo)成的巨噬細(xì)胞上清棄除，加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基（6孔板，每孔2mL）培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M1極化。48h后，顯微鏡下觀察M1細(xì)胞是否構(gòu)建成功；

（3）最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，可保持72h。

巨噬細(xì)胞進(jìn)一步誘導(dǎo)成M2型實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配置：向1640wan全培養(yǎng)基（含胎牛血清）里加入PMA（誘導(dǎo)濃度：100ng/mL）、加入IL-4(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)（abs04698）、IL-13(誘導(dǎo)濃度：20ng/mL)（abs04079）制成誘導(dǎo)培養(yǎng)基；

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將已經(jīng)誘導(dǎo)成的巨噬細(xì)胞上清棄除，加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基（6孔板，每孔2mL）培養(yǎng)48h，誘導(dǎo)其向M2極化。48h后，顯微鏡下觀察M2細(xì)胞是否構(gòu)建成功；

（3）最后，在無刺激物和無PMA的情況下，用無血清RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，可保持72h。

THP-1極化進(jìn)入M1和M2巨噬細(xì)胞圖

M1型形態(tài)多樣，偽足較多，分叉明顯，M2型形態(tài)均一，多呈長條型，分叉不明顯。

M1和M2型鑒定

上述形態(tài)是初步的鑒別方法，更準(zhǔn)確的可以通過流式細(xì)胞術(shù)一般是通過一些巨噬細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行的，常見的M1巨噬細(xì)胞標(biāo)志物有CD68、CD80、CD86、CD32等；常見M2巨噬細(xì)胞標(biāo)志物有CD206、CD204、CD163等。

M1和M2型常見鑒定marker

今天講解就到這了，大家如有細(xì)胞培養(yǎng)問題，歡迎交流哦！

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