關(guān)于WB實驗中的marker，你應(yīng)該知道的事

1、什么是蛋白marker？

蛋白Marker，也稱為蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（Protein Molecular Weight Marker），是用于蛋白質(zhì)電泳分析中的一系列已知分子量的蛋白質(zhì)混合物。它們通常包含多個不同分子量的蛋白質(zhì)條帶，這些條帶在電泳過程中會根據(jù)分子量的大小和電荷差異遷移不同的距離，從而在凝膠上形成一系列有序的條帶。

2、Marker在WB中的作用？

分子量標(biāo)定：Marker包含一系列已知分子量的蛋白質(zhì)，通過與Marker上的帶狀蛋白質(zhì)帶進行比較，可以精確地確定待測蛋白的分子量；

驗證電泳和轉(zhuǎn)印效果：Marker在電泳和轉(zhuǎn)印的過程中移動到膜上，可以幫助研究者驗證這些步驟的效果。通過檢查Marker的帶狀分布，可以確保電泳和轉(zhuǎn)印過程中沒有發(fā)生異常；

確定蛋白質(zhì)遷移距離：通過測量Marker的遷移距離，可以估算待測蛋白質(zhì)的遷移距離。這對于進一步的數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解釋非常重要；

標(biāo)定凝膠濃度：Marker還可以用于幫助研究者選擇適當(dāng)?shù)哪z濃度。不同分子量的Marker在不同的凝膠濃度下會產(chǎn)生不同的遷移模式，因此可以根據(jù)Marker的遷移特性選擇合適的凝膠濃度。

3、Marker有哪些分類，各有什么特點？

● 天然蛋白Marker：

這類Marker是從自然來源提取的蛋白質(zhì)，它們經(jīng)歷了天然的修飾過程，如裂解、二硫鍵形成、糖基化或磷酸化，并保持其復(fù)雜的3D結(jié)構(gòu)。天然蛋白Marker更接近其在體內(nèi)的自然狀態(tài)，這使得它們在藥物開發(fā)和生物醫(yī)學(xué)研究中非常有用。天然蛋白Marker可以提供更準(zhǔn)確的分子量估計，因為它們未經(jīng)過重組或合成，保持了蛋白質(zhì)的自然特性。abs9919非變性蛋白Marker (66-669kDa)，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍染色后可以得到分布均勻、密度相近的4條帶，不適用于SDS-Page，因為在SDS存在下，含有多個亞單位的蛋白會不同程度解聚。

abs9919非變性蛋白Marker(66-669kDa)

● 變性Marker：

這類Marker在生產(chǎn)過程中經(jīng)過了變性處理，通常是通過加熱和化學(xué)物質(zhì)（如SDS）的處理，以確保蛋白質(zhì)wan全展開成線性結(jié)構(gòu)。變性Marker的優(yōu)點在于它們提供了一致的蛋白質(zhì)遷移特性，這對于精確的分子量估計和實驗重復(fù)性非常重要。由于變性處理，這類Marker的蛋白質(zhì)保持一致的電荷和形狀，使得它們在電泳過程中的遷移更加可預(yù)測。

變性蛋白Marker一般可分為預(yù)染和非預(yù)染兩種

● 未預(yù)染蛋白Marker：

這類Marker包括寬分子量、高分子量和低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)。它們是較簡單、較準(zhǔn)確的一種，因為不附帶染料分子或標(biāo)記分子，所以所示大小正好是蛋白原本的大小。缺點是在電泳過程中不可見，需要在電泳結(jié)束后經(jīng)過染色才能看到，無法實時監(jiān)控電泳過程。適合精確判斷蛋白大小，但操作相對麻煩，需要額外的染色步驟。如abs9840非預(yù)染蛋白Marker (14.4-97.4kDa)，用考馬斯亮藍R-250染色可得分布均勻密度相同的六個條帶，產(chǎn)品含SDS, 不適合用于非變性膠。

abs9840非預(yù)染蛋白Marker(14.4-97.4kDa)

● 預(yù)染蛋白Marker：

這類Marker在生產(chǎn)時就結(jié)合了染料，因此在電泳過程中或轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到不同顏色的條帶。預(yù)染蛋白Marker方便實驗人員在電泳時、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率。又分為單色預(yù)染和多色預(yù)染。單色預(yù)染Marker通常會利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小，而多色預(yù)染Marker用不同的顏色來區(qū)別，更易于辨認 。需要注意的是，預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化，可能導(dǎo)致一些偏差，因此不太適合精確定位蛋白。

abs923預(yù)染蛋白Marker(10-245kDa)

● 預(yù)染發(fā)光Western Marker：

傳統(tǒng)的Western Blot試驗需要使用預(yù)染蛋白Marker來跟蹤檢測陽性抗原信號和轉(zhuǎn)膜效率，但預(yù)染蛋白Marker無法在膠片上曝光，曝光信號需要根據(jù)膜上的預(yù)染蛋白Marker來判斷。absin新品abs90004 預(yù)染發(fā)光Western Marker由9種發(fā)光蛋白和9種預(yù)染蛋白組成；9中發(fā)光蛋白分別為23、30、36、44、50、62、90、120和160KDa，這些蛋白均可與抗體結(jié)合，因此能與抗原在同一張膜上曝出信號，陽性信號可以直接通過Western Marker的位置來判斷；9種預(yù)染蛋白分別為15、25、35、40、55、70、100、130和180KDa，其中70KDa為紅色，其他為藍色，轉(zhuǎn)膜完畢后在膜上肉眼可見。

1）可與抗原同時檢測信號，使Western blot結(jié)果判斷更加簡便；

2）發(fā)光marker沒有偶聯(lián)和標(biāo)記其他分子，分子量更加準(zhǔn)確；

3）綜合發(fā)光marker和預(yù)染marker的優(yōu)勢，既能監(jiān)測轉(zhuǎn)膜又能與抗原同時檢測。

HRP標(biāo)記的Goat anti mouse IgG二抗(一抗：mouse anti P38)ECL化學(xué)發(fā)光檢測

多重?zé)晒鈾z測

按照分子量又可以將marker分為高分子量、低分子量、寬分子量等。高分子量蛋白Marker是指那些用于檢測大分子量蛋白質(zhì)的標(biāo)記，通常包含的蛋白質(zhì)分子量范圍較高，它們提供的分子量范圍通常從幾十kDa到幾百kDa不等。低分子量蛋白Marker是指用于檢測小分子量蛋白質(zhì)的標(biāo)記，通常包含的蛋白質(zhì)分子量范圍較低，從幾kDa到幾十kDa的分子量范圍。寬分子量蛋白Marker是指覆蓋寬廣分子量范圍的標(biāo)記，通常包含從低到高多個分子量的蛋白質(zhì)。

4、如何選擇marker？需要考慮什么因素？

首先看實驗類型，非變性蛋白需要非變性蛋白marker，變性蛋白則需要變性marker，兩者不可以相互替換，然后看目的蛋白大小，選擇相應(yīng)的marker，在可選條件下，寬分子量蛋白marker，是不錯的選擇，另外看實驗要求，如果需要在電泳和轉(zhuǎn)印過程中檢測，需要選擇預(yù)染marker，如果需要精確的條帶分子量大小，則需要非預(yù)染marker做參考，可以同時使用預(yù)染marker和非預(yù)染marker，除了以上因素，還需要考慮marker的使用體系，absin常見marker信息如下：

非變性蛋白電泳好物推薦

WB好物推薦

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...