分子互作研究

ChIP技術(shù)

染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于研究蛋白質(zhì)與DNA的相互作用。利用已知蛋白的特異性抗體，將與蛋白相互作用的DNA從復(fù)合物中分離出來，常見用于確定特定轉(zhuǎn)錄因子或其他染色質(zhì)結(jié)合蛋白在基因組上的結(jié)合位點(diǎn)，以及這些蛋白如何調(diào)控基因表達(dá)。

案例分享：

Interleukin-34-orchestrated tumor-associated macrophage reprogramming is required for tumor immune escape driven by p53 inactivation

Immunity. 2024 Oct 8;57(10):2344-2361.e7. doi: 10.1016/j.immuni.2024.08.015. Epub 2024 Sep 24. PMID: 39321806 IF=25.5

為了確定p53是否結(jié)合IL-34的調(diào)控區(qū)域，使用p53抗體進(jìn)行了染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)，隨后進(jìn)行了高通量測序。在IL34和CDKN1A(p21)位點(diǎn)觀察到p53的結(jié)合（圖K）。ChIP-PCR和也揭示了p53與IL34啟動子的結(jié)合（圖L）。

DNA pull down

DNA pull-down是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于研究蛋白質(zhì)與DNA之間的相互作用。該技術(shù)針對目標(biāo)區(qū)域設(shè)計特異性DNA探針并經(jīng)過脫硫生物素標(biāo)記，標(biāo)記后探針可以和偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素親和結(jié)合，再與總蛋白提取物進(jìn)行孵育，有互作的蛋白質(zhì)可以和DNA探針特異性結(jié)合，形成磁珠-DNA探針-蛋白復(fù)合物，洗滌去除非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，再經(jīng)過洗脫得到目的DNA探針－蛋白質(zhì)復(fù)合物，最后通過Western Blot或質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)類型，這種方法常用于識別轉(zhuǎn)錄因子、DNA修復(fù)蛋白或其他與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。

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DNA pulldown后WB顯示對照組和實驗組之間有差異條帶

RIP技術(shù)

RIP技術(shù)（RNA Binding Protein lmmunoprecipitation，RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀），是研究細(xì)胞內(nèi)RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)，是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動態(tài)過程的有力工具。該技術(shù)主要是運(yùn)用目標(biāo)蛋白的特異性抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來，然后經(jīng)過分離純化對結(jié)合在復(fù)合物上的RNA進(jìn)行q-PCR驗證或高通量測序分析。

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RIP后WB,結(jié)果顯示absin與進(jìn)口產(chǎn)品效果相當(dāng)，與IgG組存在差異條帶

RNA pull down

RNA pull-down是研究RNA與蛋白結(jié)合情況的技術(shù)。先將RNA進(jìn)行標(biāo)記（如生物素標(biāo)記），再與細(xì)胞裂解液共同孵育，從而形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物，進(jìn)而檢測與之結(jié)合的蛋白質(zhì)。復(fù)合物洗脫后，通過Western blot(pull down-WB)實驗和質(zhì)譜(pull down--MS)技術(shù)檢測目標(biāo)RNA是否與某些蛋白相互作用。

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pulldown后銀染及富集效果檢測qPCR

CoIP

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗體和蛋白的特異性親和作用，通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體，進(jìn)而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白，同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

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Targeted knockdown of PGAM5 in synovial macrophages efficiently alleviates osteoarthritis

Bone Res. 2024 Mar 4;12(1):15. doi: 10.1038/s41413-024-00318-8.PMID: 38433252 IF=12.7

DVL2和PGAM5在M1和M2巨噬細(xì)胞中的免疫共沉淀(abs955)

GST Pull Down

GST Pull-Down實驗基于GST(glutathione-S-transferase)，即?胱?肽-S-轉(zhuǎn)移酶蛋?，可以與?胱?肽(Glutathione，GSH)結(jié)合，將GSH固定于磁珠上，形成GSH-磁珠，將已知蛋?X與GST融合表達(dá)，獲得的GST-X蛋?可與GSH-磁珠結(jié)合，若體系中存在與X蛋?互做的蛋?Y，則會形成“磁珠-GSH-GST-X-Y"復(fù)合物，與X蛋?互做的蛋?即可被分離并檢測。

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...