新一代CRBN Binding Kit能否迎來TPD的另一個春天

更新時間：2025-09-15 點擊次數(shù)：228

過去十年，靶向蛋白降解（TPD）從實驗室寵兒躍升為千億級產(chǎn)業(yè)，Cereblon（CRBN）作為較常用的 E3 酶之一，其配體親和力數(shù)據(jù)直接決定 PROTAC 分子的活性窗口。然而，一個被忽視的技術(shù)細(xì)節(jié)——示蹤劑（tracer）的標(biāo)記方式——正悄悄拉大我們與真實客觀數(shù)值的距離。

進(jìn)口R品牌的高通量CRBN Binding Kit 用“沙利度胺-熒光蛋白"作為示蹤劑，在行業(yè)內(nèi)先建立了高通量篩選范式，這一方案如今被我們重新拆解、驗證、升級。它不是簡單的“國產(chǎn)替代"，而是對實驗失真問題的系統(tǒng)性修復(fù)，讓IC50更加接近客觀真值。

失真源頭：當(dāng) 105 kDa 的 APC 蛋白騎在 0.25 kDa 的沙利度胺頭上

XL665作為第一代acceptor，是改良過的別藻藍(lán)蛋白（APC），將 APC的亞基偶聯(lián)，增加了穩(wěn)定性，位于紅外光區(qū)，激發(fā)波長 620nm，發(fā)射波長665nm，進(jìn)一步降低了生物溶液對實驗的影響（生物學(xué)成分很少在紅外光區(qū)有自發(fā)熒光），XL665作為acceptor在CRBN Binding中使用，分子量約為105 kDa，但是與沙利度胺偶聯(lián)后，對體系有以下影響：

空間位阻：

? APC/XL665 的直徑≈6nm，相當(dāng)于沙利度胺長度的 10 倍，在 CRBN 淺口袋入口形成“熒光墻"；
? 大分子熒光標(biāo)記會在 CRBN 淺口袋入口處產(chǎn)生空間位阻，導(dǎo)致表觀 K_d 被系統(tǒng)性高估 1.5–4 倍。

擴散速率：

? 蛋白示蹤劑整體分子量高，擴散系數(shù) D 下降；
? 小分子候選物（< 0.5 kDa）擴散系數(shù)遠(yuǎn)高于kit中標(biāo)記后的沙利度胺，競爭環(huán)境失衡。

結(jié)果失真：

? 以上這些影響因素導(dǎo)致IC50數(shù)值與結(jié)果存在偏差，影響候選物的選擇

技術(shù)破局：把小分子還給小分子

用分子量小于1kDa的小分子熒光團直接標(biāo)記沙利度胺，從物理層面消除兩大失真因子，競爭動力學(xué)回到“小分子對小分子"的公平賽道，讓每一次 IC50都經(jīng)得起臨床拷問。

數(shù)據(jù)說話

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖表可知，由于Thalidomide標(biāo)準(zhǔn)品與Thalidomide-Ac競爭與CRBN/DDB1的結(jié)合，使信號值降低。

（2）結(jié)合活性和抑制劑驗證*

Thalidomide-Ac與CRBN/DDB1結(jié)合驗證，由結(jié)果可知，蛋白濃度不變時，檢測信號隨著Thalidomide-Ac濃度的升高而增加。Lenalidomide和Pomalidomide以及PROTAC BET Degrader-1可以競爭Thalidomide-Ac與CRBN/DDB1的結(jié)合。

*數(shù)據(jù)僅做示例參考

不止于 CRBN，更有 PROTAC的“一站式解決方案"

? 基于TR-FRET的三元復(fù)合物篩選

標(biāo)曲	貨號	商品名
	abs560016	Human BRD4/CRBN PROTAC Binding Kit
	abs560042	Human BCL-XL/CRBN PROTAC Binding Kit
	abs560044	Human BCL-XL/VHL PROTAC Binding Kit
	abs560012	Human DDB1-CRBN&GSPT1 Binding Kit
	abs560054	HumanVAV1/CRBN PROTAC Binding Kit

? PROTAC藥靶蛋白

靶點縮寫	主要針對疾病	PROTAC	Absin	UA
AR（雄激素受體）	前列腺癌	ARV-110		UA080416
BCL6	淋巴瘤			UA080266
Bcl-X(L)	淋巴瘤		abs06285
B-rafV600E	惡性黑色素瘤			UA080261
BRD4	多種癌癥			UA080277
BRD9	多種癌癥
BTK	慢性淋巴細(xì)胞白血病	NX-2127		UA080041
EGFR	非小細(xì)胞肺癌		abs05321
ER（雌激素受體）	乳腺癌	ARV-471	abs04404
IRAK4	自身免疫性疾病			UA080294
KRASG12D	實體瘤	ASP-3082		UA010733
MDM2	多種癌癥	MD-224	abs06561
NTRK	實體瘤		abs05487
STAT3	復(fù)發(fā)或難治性淋巴瘤	KT-333		UA080435

? PROTAC分子——陽性對照

貨號	商品名	靶點
abs820796	(S,R,S)-AHPC hydrochloride	E3 ligase VHL
abs828204	ACBI1	SMARCA4:11 nM, SMARCA2:6 nM, PBRM1:32 nM
abs828800	AR Antagonist 1	Androgen Receptor:
abs825142	ARD-2128	VCaP:4 nM (IC50), LNCaP:5 μM (IC50)
abs821542	BETd-260	BRD4PROTAC
abs828404	BSJ-4-116	CDK12:6 nM
abs819411	dBET1	BRD4
abs826439	Dbet57	BRD4 (BD1):500 nM (DC50)
abs825346	dBRD9	ligand that recruits the cereblon E3 ubiquitin ligase:104 nM
abs821654	dTRIM24	TRIM24.
abs824454	LC-2	KRAS(G12C):0.25-0.76 μM (DC50)
abs819853	MD-224	MDM2
abs826178	MS4078	EML4-ALK:59 nM(DC50; NPM-ALK:11 nM(DC50);ALK:33 nM
abs828684	MT-802	BTK:1 nM(DC50)
abs821197	MZ 1	BRD4
abs821447	MZP-54	Brd4BD2
abs820470	PROTAC ERRα Ligand 1	IC50s of 0.04 and 2.8 μM for ERRα and ERRγ
abs828072	PROTAC ERRα Ligand 2	ERRα:5.67 nM
abs821731	TD-106	CRBN
abs823151	THAL-SNS-032	CDK9
abs826853	UNC6852	EED:247 nM
abs818009	VH-298	VHL:HIF-α
abs826121	YX-2-107	CDK6:4.4 nM
abs827426	ZEN-3219	BRD4BD1:0.48 μM, BRD4 BD2:0.16 μM

? PROTAC靶點相關(guān)抗體

靶點	貨號	品名
Ubiquitin	abs155938	Mouse anti-Ubiquitin Monoclonal Antibody
AR	abs145396	Rabbit anti-Androgen Receptor mAb (JRMR-244)
BCL6	abs145233	Rabbit anti-BCL6 Monoclonal Antibody(JRMR-56)
Bcl-X(L)	abs159218	Rabbit anti-Bcl-XL Monoclonal Antibody(2D3)
B-rafV600E	abs173916	Rabbit anti-BRAF Recombinant mAb (S-1328-60)
BRD4	abs133244	Rabbit anti-Brd4 Polyclonal Antibody
BRD9	abs117685	Rabbit anti-BRD9 Polyclonal Antibody
More......

TPD 的黃金時代已經(jīng)到來，但黃金也需要準(zhǔn)確的刻度。我們相信，真實的數(shù)據(jù)是創(chuàng)新最大的加速器。當(dāng)示蹤劑的分子量回到小于1kDa，我們不僅修復(fù)了一個實驗參數(shù)，更為整個行業(yè)節(jié)省了大量時間、資本與試錯的生命。

好消息！Absin文獻(xiàn)獎勵重磅升級！

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...