鎖相膠（PLG）—水/有機相分離神器

一、產(chǎn)品簡介

鎖相膠，（Phase Lock Gel，PLG）可消除酚提取過程中的相間蛋白質(zhì)污染，PLG在離心過程中遷移，在水/有機萃取物的各相之間形成緊密的密封。有機相和中間相材料被有效地捕獲在隔離層中，PLG 就像一把鎖，緊緊鎖住了可能污染核酸的雜質(zhì)，也就最大限度地釋放了樣品中的核酸。

鎖相膠（PLG）使用流程

本品適合所有公司的 TriiZol（包括 Invitrogen），可純化RNA和DNA。此外，PLG不僅限于核酸提取，還可用于任何需要水相-有機相分離的實驗，尤其在去除蛋白質(zhì)、提高產(chǎn)物純度方面表現(xiàn)優(yōu)異，適用于分子生物學、生物化學、蛋白質(zhì)組學等多個領(lǐng)域。

產(chǎn)品特色與優(yōu)勢：

1、消除核酸溶液的相間污染。

2、核酸產(chǎn)量提高 30％。

3、凝膠屏障可輕松傾析樣品。

4、減少與有害有機溶劑的接觸。

5、不受任何標準的核酸限制性酶和修飾酶的影響。

二、使用方法

以愛必信的TriiZol（abs60154）為例
 

1、細胞裂解

組織樣本

 TriiZol用量：每 50-100 mg 組織加 1 mL TriiZol，樣品體積不應超過 TriiZol 體積的 10％。

（1）將動物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理。

（2）將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有 1 mL TriiZol 的2 mL離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻，置于冰上，待所有的樣品研磨完。

（3）裂解產(chǎn)物應呈澄清的透明粘稠液體。對于富含蛋白、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結(jié)節(jié)部位等，勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì)，可于 4℃ 12,000 x g 離心 10 min，然后吸取上清至一新的離心管中。

細胞樣本

（1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每 10 cm²培養(yǎng)面積（6 孔板單孔或 35 mm 平皿）加入 1 mL TriiZol，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細胞wan全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 注：TriiZol 的使用量應由培養(yǎng)皿表面 積決定，而非由細胞數(shù)目決定。TriiZol 量不足可能導致提取的 RNA 中有 DNA 污 染 。

（2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，每 5-10×10⁶動植物或酵母細胞，或每 1×10⁷細菌細胞加入 1mL TriiZol， 用加樣器吹打，使其wan全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 注：添加 TriiZol 前切勿洗滌細胞 ，以免 RNA 降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞 。

2、液相分離

（1）裂解產(chǎn)物于室溫放置 5 min，使核酸-蛋白復合物wan全分離。（注：此時樣品可在-80℃長期保存。

（2）取1支2mL鎖橡膠（使用前12000x g ,離心30s ），將裂解產(chǎn)物和0.2 mL 氯仿（每 1 ml TriiZol 加入 0.2 ml 氯仿）加入鎖橡膠中，蓋緊管蓋，手動振蕩 15 s（禁止渦旋），室溫放置 2-3 min。

（3）4℃ 12,000 x g 離心 15 min，鎖橡膠會在水相和有機相之間形成一層致密的固體，將中間層的蛋白雜質(zhì)和下層有機相wan全鎖在固體之下。

• 吸取含總 RNA 的上層水相至一新的離心管中，全部水相樣品可輕松吸出，wan全不用擔心混入雜質(zhì)，也不用擔心酚氯仿會不小心流出來。（注：對于大體積的樣品抽提，還可以直接將全部水相倒出而有機相依然被牢牢“鎖定"在管底不會流出。）

3、RNA 回收

（1）按照每 1 mL TriiZol 的最初使用量加入 0.5 mL 異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置 10 min。

（2） 4℃ 12,000 x g 離心 10 min，棄除上清，可見膠狀的 RNA 沉淀。

（3）按照每 1 mL TriiZol 的最初使用量加入 1 mL 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀。

（4）4℃ 12,000 x g 離心 5 min，棄除上清。

（5）室溫倒置 5-10 min 晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機，以免 RNA 過干，難以溶解）。

（6）加入適量（如 25uL） DEPC-ddH2O 或 TE 緩沖液，用加樣器吹打數(shù)次溶解 RNA。

（7）通過 RNA 電泳以及紫外分光光度計檢測，確定 RNA 的濃度、純度和完整性。

（8）所得的 RNA 應立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融。

注意事項

該試劑在室溫下保存時穩(wěn)定，請勿凍結(jié)。

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