IPS誘導(dǎo)胰島類器官培養(yǎng)攻略

更新時(shí)間：2025-11-04 點(diǎn)擊次數(shù)：189

一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1、hPSC誘導(dǎo)分化胰島類器官試劑盒（abs90131-1kit）

產(chǎn)品組成：

培養(yǎng)階段	編號(hào)	名稱	規(guī)格	保存
EB形成階段	I01	EB 形成培養(yǎng)基	30mL	-20℃，12個(gè)月
EB形成階段	I01-S	EB 形成補(bǔ)充劑	60uL	-20℃，6個(gè)月
定形內(nèi)胚層(DE) 誘導(dǎo)階段	I02	基礎(chǔ)培養(yǎng)基1	50mL	-20℃，12個(gè)月
定形內(nèi)胚層(DE) 誘導(dǎo)階段	I02-A	補(bǔ)充劑A	250uL	-20℃，6個(gè)月
胰腺內(nèi)胚層(PE) 誘導(dǎo)階段	I03	基礎(chǔ)培養(yǎng)基2	60mL	-20℃，12個(gè)月
胰腺內(nèi)胚層(PE) 誘導(dǎo)階段	I03-B	補(bǔ)充劑B	30uL	-20℃，6個(gè)月
內(nèi)分泌祖細(xì)胞 (EP)誘導(dǎo)階段	I04	基礎(chǔ)培養(yǎng)基3	50mL	-20℃，12個(gè)月
內(nèi)分泌祖細(xì)胞 (EP)誘導(dǎo)階段	I04-C	補(bǔ)充劑C	650uL	-20℃，6個(gè)月
胰島類器官成熟階段	I05	基礎(chǔ)培養(yǎng)基4	200mL	-20℃，12個(gè)月
胰島類器官成熟階段	I05-D	補(bǔ)充劑D	600uL	-20℃，6個(gè)月

2、輔助試劑

	貨號(hào)	品名	規(guī)格	儲(chǔ)存條件及周期
1	abs962	PBS	500mL	2~8℃或室溫下保存，有效期12 個(gè)月。
2	abs9404	Advance 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基	100mL	-20℃保存，有效期2年。
3	abs9409	人多能干細(xì)胞消化液	100mL	-20℃保存，有效期2年。

3、實(shí)驗(yàn)耗材

	品名	貨號(hào)	規(guī)格	儲(chǔ)存條件及周期
1	細(xì)胞培養(yǎng)板（標(biāo)準(zhǔn)透明6孔板）	abs7033	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
2	超低吸附培養(yǎng)板（6孔板）	abs7056	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
3	1.5 mL離心管	abs7119	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
4	15 mL離心管	abs7120	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
5	50 mL離心管	abs7121	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
6	10mL一次性移液管	abs7053	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
7	50mL一次性移液管	abs7055	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
8	10uL吸頭（盒裝，無(wú)菌無(wú)酶）	abs7072	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
9	200uL吸頭（盒裝，無(wú)菌無(wú)酶）	abs7075	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。

二、誘導(dǎo)流程圖

三、試劑盒使用流程：

①EB 形成（2 天）

1、hPSC 于基質(zhì)膠包被的標(biāo)準(zhǔn)透明6孔板的一個(gè)孔，加入2mLAdvance 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，使細(xì)胞生長(zhǎng)至 70-80%匯合度。

2、將孔中的培養(yǎng)基吸除。

3、在消化期間配置EB形成wan全培養(yǎng)基：取 11mL EB 形成培養(yǎng)基與 22μL EB 形成補(bǔ)充劑混勻獲得 EB 形成wan全培養(yǎng)基，于一個(gè)新的超低吸附 6孔板的 3 個(gè)孔每孔加入 2mL EB 形成wan全培養(yǎng)基，準(zhǔn)備后續(xù)使用。

4、向孔中加入 1mL PBS（無(wú)鈣鎂離子）洗，吸去。

5、向孔中加入 1mL accutase，37℃消化 3min。

6、當(dāng)看到克隆發(fā)白發(fā)亮，輕輕拍打板側(cè)（每側(cè)拍兩下），把細(xì)胞拍下來(lái)，再在生物安全柜中，加入 1mL EB 形成wan全培養(yǎng)基終止消化，把這 2mL 體系吸入裝有 3mL EB 形成wan全培養(yǎng)基的15mL 離心管離心 160g 5min，吸棄上清至剩余幾十微升，輕彈管底 3-4 下，讓細(xì)胞沉淀溶于上清。

7、往管里加 1mL EB 形成wan全培養(yǎng)基，輕彈 3-4 下，混勻即可，把這1mL細(xì)胞懸液平均懸空加入提前準(zhǔn)備的超低吸附 6孔板3 個(gè)孔中，37℃、5%CO₂過(guò)夜。

8、第二天（D-1）鏡下觀察可以看到形成大量、均一的 EB，半數(shù)換液，補(bǔ)充 50%EB 形成培養(yǎng)基（不含補(bǔ)充劑），置于水平搖床培養(yǎng)。（注意：所用培養(yǎng)基均應(yīng)提前在工作臺(tái)放置 30min以恢復(fù)室溫，后面操作同理。）

②DE 誘導(dǎo)（5 天）

9、D0，解凍補(bǔ)充劑 A，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基 1 與補(bǔ)充劑 A 混勻，作為 DE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，恢復(fù)室溫。

10、吸出孔中 EB 形成培養(yǎng)基，注意不要將 EB 吸出。

11、每孔加入 2mL DE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，放入 37℃，5%CO₂的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

12、每天更換 DE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，持續(xù) 5 天。

③PE 誘導(dǎo)（6天）

13、D5，解凍補(bǔ)充劑 B，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基 2 與補(bǔ)充劑 B 混勻，作為 PE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基。每孔每天更換 2mL PE 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，操作如 9、10，持續(xù) 6 天。

④EP 誘導(dǎo)（5天）

14、D11，解凍補(bǔ)充劑 C，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基 3 與補(bǔ)充劑 C 混勻，作為 EP 誘導(dǎo)培養(yǎng)基。每孔每天更換 2mL EP 誘導(dǎo)培養(yǎng)基，操作如 9、10，持續(xù) 5 天。

⑤胰島類器官成熟階段（以20天為例）

15、D16，解凍補(bǔ)充劑D，將基礎(chǔ)培養(yǎng)基4與補(bǔ)充劑D混勻，作為胰島類器官成熟培養(yǎng)基。每孔每天更換2mL成熟培養(yǎng)基，操作如 9、10，持續(xù)20天。

本期小愛(ài)推薦

貨號(hào)	品名	規(guī)格	儲(chǔ)存條件及周期
abs90131	hPSC誘導(dǎo)分化胰島類器官試劑盒	kit	-20℃保存，基礎(chǔ)培養(yǎng)基有效期12個(gè)月，補(bǔ)充劑有效期6個(gè)月。
abs9404	Advance 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基	100mL	-20℃保存，有效期2年。
abs9409	人多能干細(xì)胞消化液	100mL	-20℃保存，有效期2年。
abs962	PBS	500mL	2~8℃或室溫下保存，有效期12 個(gè)月。
abs7033	細(xì)胞培養(yǎng)板（標(biāo)準(zhǔn)透明6孔板）	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7056	超低吸附培養(yǎng)板（6孔板）	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7119	1.5 mL離心管	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7120	15 mL離心管	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7121	50 mL離心管	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7053	10mL一次性移液管	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7055	50mL一次性移液管	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7072	10uL吸頭（盒裝，無(wú)菌無(wú)酶）	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。
abs7075	200uL吸頭（盒裝，無(wú)菌無(wú)酶）	1箱	室溫，保質(zhì)期3年。

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爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

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