Western Blot（WB）技術作為蛋白質研究領域的核心手段，其實驗流程的嚴謹性與試劑的穩(wěn)定性直接影響實驗結果的可靠性。WB輔助試劑盒（小鼠）專為小鼠來源樣本的WB實驗設計，整合了實驗全流程所需的關鍵試劑，極大簡化了試劑準備環(huán)節(jié)，助力科研人員高效完成蛋白質檢測工作。
完整操作指南
遵循以下步驟進行實驗，可保障實驗流程的規(guī)范性與結果的準確性，各環(huán)節(jié)關鍵參數(shù)已經(jīng)過優(yōu)化驗證：
1.樣品處理：取制備好的蛋白裂解液，與2*上樣緩沖液按等體積比例混合，充分混勻后于100℃加熱煮沸10min，隨后以12000rpm轉速離心5min，取適量上清液用于上樣。
2.電泳分離：使用新鮮配制的電泳液，先以90V電壓電泳20min使樣品充分濃縮，隨后調整電壓至120V，繼續(xù)電泳直至蛋白分離達到預期效果。
3.轉膜操作：采用配制完成的電轉液，設置100V恒壓條件進行電轉，轉膜時間為90min，確保蛋白質高效轉移至PVDF膜上。
4.封閉處理：用1*TBST緩沖液配制5%的脫脂奶粉或BSA封閉液，將轉膜后的PVDF膜置于封閉液中，在室溫搖床上孵育60min，以封閉膜上的非特異性結合位點。
5.一抗孵育：將封閉后的膜與稀釋好的特異性一抗孵育，置于2-8℃低溫搖床上孵育過夜，確保一抗與靶蛋白充分結合。
6.洗滌除雜：棄去一抗孵育液后，用1*TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10min，去除未結合的游離一抗。
7.二抗孵育：加入試劑盒配套的anti-mouse-HRP二抗（#abs20001），在室溫搖床上孵育60min，使二抗與一抗特異性結合。
8.二次洗滌：同步驟6，用1*TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10min，去除未結合的二抗，避免背景干擾。
9.顯色曝光：取顯色A液與顯色B液按等體積比例混合，將混合后的顯色液均勻鋪滿整張膜，反應2min后，即可通過化學發(fā)光成像系統(tǒng)進行曝光檢測。
地址：上海市浦東新區(qū)新浩路58號申江科創(chuàng)園18棟
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