細(xì)胞凍存液(含血清)

一、細(xì)胞凍存步驟：
1、常規(guī)方法收集對數(shù)期的貼壁細(xì)胞或者懸浮細(xì)胞于試管中。
2、根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存的細(xì)胞數(shù)。
3、將所需數(shù)目的細(xì)胞懸浮液置于離心管中，1000rpm離心5分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，che底棄去離心管中的上清液。
4、加入適量的本凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度約為1×106-1×107/ml。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液。
5、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記的凍存管中。
6、密封標(biāo)記后按常規(guī)操作流程依次經(jīng)4℃，-20℃，-80℃直至液氮罐或用程序降溫儀逐級降溫凍存。

二、凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟：
1、 從冰箱中取出凍存的細(xì)胞，立即置于37℃水浴槽中快速解凍。
2、 待凍存管中的細(xì)胞混合液wan全融化后，立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基于凍存管中與細(xì)胞混合，將其中的混合液移至含有約5ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中，1000rpm離心5分鐘，收集凍存細(xì)胞沉淀，移去上清液（注意勿將細(xì)胞沉淀倒掉）。
3、 加入適量的新鮮培養(yǎng)基，使用移液管緩緩加入細(xì)胞沉淀中，輕柔混勻，將混勻好的細(xì)胞移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。
4、 鏡檢觀察，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后可進(jìn)行其他研究或者培養(yǎng)處理。

-20℃保存，有效期2年。

1、取用凍存液均要在超凈工作臺內(nèi)無菌操作 。
2、初次使用融化后可在2-8℃保存至少1個(gè)月，少量蛋白析出不影響凍存效果。 
3、凍存時(shí)從室溫可快速降到0℃，再降溫時(shí)一般按每分鐘降溫1～2℃，待降至-80℃以下時(shí)可放入液氮中，在液氮中細(xì)胞可保存數(shù)年或更長時(shí)間.
4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

溶液