DAPI染色液

3μM

懸浮細(xì)胞： 
（1）收集懸浮細(xì)胞2×105 ~1×106個細(xì)胞，通過離心（通常300-500×g，5分鐘）沉淀細(xì)胞，棄上清； 
（2）加入1mL預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞沉淀，再次離心洗滌，去除殘留的培養(yǎng)基和其他雜質(zhì)；
（3）（可選）使用4%多聚甲醛（PFA）或其他固定劑，在室溫下固定細(xì)胞5-15分鐘。然后用PBS清洗細(xì)胞2次，每次5分鐘，去除未結(jié)合的固定劑，對于保持細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)特別有用。
（4）通過離心沉淀細(xì)胞，棄上清，加入1mL DAPI 染色液，輕輕混勻后，室溫避光孵育 5-15 分鐘。
（6）流式細(xì)胞術(shù)上機(jī)檢測（通常不需要清洗，多余的染色液不會顯著影響數(shù)據(jù)質(zhì)量）；如果使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞，建議用PBS洗滌細(xì)胞2-3次以去除多余的DAPI染色液，在載玻片上滴一滴抗淬滅封片介質(zhì)，覆蓋蓋玻片，避免產(chǎn)生氣泡。使用配備有 UV 或藍(lán)色激發(fā)光源（358 nm 左右）的熒光顯微鏡觀察，DAPI 的發(fā)射光譜峰值約為 461 nm，呈現(xiàn)亮藍(lán)色熒光。
貼壁細(xì)胞：
（1）（可選）使用4%多聚甲醛（PFA）或其他固定劑，在室溫下固定細(xì)胞5-15分鐘。然后用PBS清洗細(xì)胞2次，每次5分鐘，去除未結(jié)合的固定劑，這一步驟非常重要，因為殘留的固定劑可能會影響后續(xù)染色的效果。
（2）（可選）使用通透化試劑（如 0.1% Triton X-100）來破壞細(xì)胞膜，在室溫孵育5-10分鐘，使抗體或其他染料更容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。然后用PBS再次清洗細(xì)胞3次。
（3）吸去最后一次洗滌用的PBS，滴加適量的 DAPI 染色液，輕輕搖晃以確保均勻覆蓋所有細(xì)胞。室溫避光孵育5-15分鐘。 
（4）孵育結(jié)束后，用PBS輕輕洗滌細(xì)胞2-3次，以去除多余的DAPI染料。注意不要過度洗滌以免損傷細(xì)胞或造成染料脫失。
（5）使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞，在載玻片上滴一滴抗淬滅封片介質(zhì)，覆蓋蓋玻片，避免產(chǎn)生氣泡。使用配備有 UV 或藍(lán)色激發(fā)光源（358 nm 左右）的熒光顯微鏡觀察，DAPI 的發(fā)射光譜峰值約為 461 nm，呈現(xiàn)亮藍(lán)色熒光。

-20℃，避光，有效期12個月。

1、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
2、避免反復(fù)凍融，否則容易失效。
3、DAPI對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

DAPI Staining Solution

二甲基甲酰胺溶液