SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒

產(chǎn)品介紹

      該產(chǎn)品是專門用于懸浮細(xì)胞核酸高效轉(zhuǎn)染的試劑盒。它具有非常zhuo越的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)懸浮細(xì)胞，在部分懸浮細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)85%以上（EGFP質(zhì)粒）。其功能強(qiáng)大，不僅可高效轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒 DNA，還可高效轉(zhuǎn)染 mRNA、siRNA、mimics 和各種小分子 DNA。與目前市場(chǎng)上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同， 該產(chǎn)品采用生物可降解材料配制，對(duì)細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后 24 小時(shí)細(xì)胞幾乎無(wú)明顯死亡。使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒 DNA 混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA 復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡(jiǎn)便。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、zhuo越的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)85%以上；

2、轉(zhuǎn)染功能強(qiáng)大，不僅可高效轉(zhuǎn)染大分子質(zhì)粒DNA，還可高效轉(zhuǎn)染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA；

3、極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響；

4、操作簡(jiǎn)便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

操作步驟：

一、質(zhì)粒DNA 轉(zhuǎn)染（以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、 細(xì)胞接種:

1、 轉(zhuǎn)染前一天或者兩天接種細(xì)胞，接種細(xì)胞量為4-7×10 5 個(gè)；

2、確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞比活度為90%以上，且生長(zhǎng)狀態(tài)良好；

3、 如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前一天鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)可以不用換液，如果細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)最好換液。

B、、 SP /DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):

1、 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，再加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

2、在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，并加入適量的溶液A，輕輕混勻，再加入適量的DNA，見附表。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3、將DNA-培養(yǎng)基混合物滴加至SP-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。注意： SP-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。

注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉(zhuǎn)染:

1、 將擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞強(qiáng)烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液，無(wú)細(xì)胞結(jié)團(tuán)。

2、 將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、 培養(yǎng)24~96小時(shí)后觀察或收獲。

4、 SP在wan全培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)專用的無(wú)血清培養(yǎng)基。

二、siRNA 轉(zhuǎn)染（以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:

A、細(xì)胞接種:

1、轉(zhuǎn)染前一天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)接，使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度為30-50%左右，且生長(zhǎng)良好、無(wú)支原體污染（非常重要）；

2、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營(yíng)養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

B、 SP /siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備 (該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):

1、在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉(zhuǎn)染試劑(見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

2、 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，并添加適量的siRNA（見下表），用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3、 將siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至SP-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。

C、轉(zhuǎn)染:

1、 將擬轉(zhuǎn)染細(xì)胞強(qiáng)烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液，無(wú)細(xì)胞結(jié)團(tuán)。

2、 將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板。加完后，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、37°C培養(yǎng)24-72h，檢測(cè)基因抑制效果。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng)4-6h時(shí)可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。

4、SP 在wan全培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清或低血清培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)：

1、shou次轉(zhuǎn)染，請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，每孔質(zhì)粒用量0.8ug，SP 可選擇2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul進(jìn)行優(yōu)化。24孔板siRNA轉(zhuǎn)染，SP 用量2ul，siRNA用量可選10pmol、20pmol、30pmol、40pmol進(jìn)行優(yōu)化。

2、在制備DNA或siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)，應(yīng)避免制備體系中存在血清，因血清會(huì)干擾SP 與DNA或siRNA形成復(fù)合物。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞死亡。

3、溶液A僅用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，RNA或siRNA轉(zhuǎn)染不需加入溶液A。

4、 請(qǐng)注意質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和siRNA轉(zhuǎn)染時(shí)對(duì)細(xì)胞密度和轉(zhuǎn)染試劑用量等條件的差異，不要混用同一條件。

5、懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染難度大，且受細(xì)胞種類、細(xì)胞密度、細(xì)胞生長(zhǎng)情況、培養(yǎng)方法、操作手法等因素的影響，研究者在轉(zhuǎn)染之前，應(yīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)，認(rèn)真準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染方案，并對(duì)轉(zhuǎn)染效果有比較理性的判斷。

6、本產(chǎn)品適合于質(zhì)粒DNA、siRNA分別獨(dú)立轉(zhuǎn)染，如需質(zhì)粒DNA、siRNA共轉(zhuǎn)，請(qǐng)選用核酸共轉(zhuǎn)染試劑abs60317。

附表 1： 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件