快速內(nèi)切酶BspQI

BspQI屬于 Type IIS 型限制酶，識別非回文序列，并在識別序列之外進(jìn)行切割，常用于Golden Gate組裝。經(jīng)過優(yōu)化的反應(yīng) Buffer使BspQI最大限度發(fā)揮功能，同時(shí)反應(yīng)緩沖液包含重組白蛋白，其可增強(qiáng)多種酶的穩(wěn)定性。
識別位點(diǎn)：
5'...C G T C T T C (N)1↓...3'
3'...G C A G A A G (N)4↑...5'
同裂酶：SapI, LguI, PciSI
注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
建議反應(yīng)條件：
1× HN 緩沖液；
50℃溫育；
參照“DNA 酶切流程"配制反應(yīng)體系。
失活條件：
80℃溫育 20 min
活性定義：
1 活性單位(U) 是指在 50 μl 反應(yīng)體系中，50℃ 1 h 內(nèi)wan全酶切1 µg λDNA 所需的酶量。

產(chǎn)品組成：

質(zhì)量控制：
超長時(shí)間溫育檢測 ：
最適反應(yīng)溫度下，將 10 U BspQI 與 1 μg λDNA 共同溫育 3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時(shí)酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切-連接-再酶切檢測：
最適反應(yīng)溫度下，使用10 U BspQI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
DNase 殘留檢測：
將10 U BspQI與雙鏈DNA底物在 37℃溫育 16 h，通過 DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。