類器官凍存液

類器官凍存液（Organoid Cryopreservation Medium）可應(yīng)用于多種哺乳動(dòng)物（ 如人、 鼠） 來源的類器官和細(xì)胞系的低溫長期保存。

1. 向回收后的類器官（或細(xì)胞） 中加入預(yù)冷的（2-8℃）類器官凍存液，吹打混勻后迅速轉(zhuǎn)移至細(xì)胞凍存管中（凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液體積應(yīng)大于 0.5ml）。注意： 每 1ml 凍存液推薦凍存 1x103-1x107 個(gè)細(xì)胞或?qū)?yīng)細(xì)胞量的類器官。
2. 將凍存管放入細(xì)胞凍存降溫盒內(nèi)（降溫盒須提前平衡至室溫或 4℃），隨后立即將降溫盒放入-80 ℃超低溫冰箱中；也可將凍存管進(jìn)行人工梯度降溫處理，如 4℃ 靜置 10 分鐘，-20℃保存 1 小時(shí)，-80℃保存過夜。
3. 次日或 12 小時(shí)后將凍存管于低溫條件下（不高于-70℃，推薦使用干冰或原降溫盒）轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。

若類器官（或細(xì)胞）復(fù)蘇，可按以下步驟進(jìn)行：
1. 取10 ml類器官培養(yǎng)緩沖液 B于15 ml離心管。
2.  從液氮罐中取出凍存的類器官細(xì)胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
3.  水浴融解過程中，需輕輕搖動(dòng)冷凍管，以確保凍存液在 1-2 分鐘內(nèi)wan全融解。
4.  將溶解后的類器官細(xì)胞快速轉(zhuǎn)移至15 ml離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300 g離心5分鐘，然后除去上清液并收集類器官細(xì)胞沉淀。添加適量類器官緩沖液 B重懸移入1.5 ml離心管300 g離心5 min。
5.  基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠，添加500 ul類器官培養(yǎng)基 A。

注：類器官凍存液（abs9519）可搭配類器官培養(yǎng)基使用。

-20°C