OCT包埋劑：冰凍切片的關(guān)鍵支撐者

實驗臺上，那塊小小的組織如何在冷凍后能被切成薄如蟬翼的切片？答案就藏在一種名為OCT包埋劑的水溶性混合物中。

在免疫組化實驗室中，研究人員通常會將組織樣本平放于包埋盒內(nèi)，加入適量OCT包埋劑浸沒組織，隨后將包埋盒緩慢平放入盛有液氮的容器內(nèi)。

當(dāng)包埋盒底部接觸液氮開始?xì)饣序v，保持原位大約10-20秒鐘，組織即迅速凍結(jié)，隨后便可用于冰凍切片。這一過程依賴于OCT包埋劑的支撐，使柔軟的組織能夠變成適合切片的堅硬塊狀結(jié)構(gòu)。

定義：什么是OCT包埋劑？

OCT包埋劑，英文全稱為Optimal Cutting Temperature compound（較優(yōu)切割溫度化合物），是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物。又稱為OCT冰凍切片包埋劑。

它已在免疫組化實驗室中廣泛應(yīng)用，主要作用是在冰凍切片時支撐組織，以增加組織的連續(xù)性，減少皺折及碎裂。

OCT包埋劑為水溶性，在漂片時可溶于水，因此在后續(xù)的染色中不會增加背景染色。利用OCT混合物預(yù)先浸潤組織，然后再進(jìn)行恒冷箱切片，能夠顯著改善切片質(zhì)量。從物理特性來看，OCT包埋劑具有適當(dāng)?shù)恼吵矶?，使組織與樣品托有很強(qiáng)的黏附性。它在溶劑還未凍結(jié)時，仍為液體的情況下，可以適當(dāng)移動標(biāo)本，調(diào)整組織的固定方向。

圖 OCT包埋劑(#abs9756)

核心功能：OCT包埋劑的作用原理

OCT包埋劑的核心功能是在冰凍切片時支撐組織。通過增加組織的連續(xù)性，它能有效減少皺折和碎裂，提高切片質(zhì)量。

在切片過程中，OCT包埋劑使組織柔軟易切，保持組織原有的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，這對于后續(xù)的觀察和分析至關(guān)重要。由于其水溶性特性，在漂片時可溶于水，不會在樣品和載玻片上留下殘留物。這一特性避免了在后續(xù)染色實驗中增加背景染色，確保了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

OCT包埋劑還能快速冷凍組織樣本，使晶體形成的傷害最小化，從而保持樣本的原始形態(tài)和結(jié)構(gòu)，便于直接觀察細(xì)胞和組織的形態(tài)學(xué)特征。

實踐應(yīng)用：OCT包埋劑的使用方法

1）標(biāo)準(zhǔn)包埋流程

根據(jù)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院的實驗動物飼養(yǎng)與管理指南，OCT包埋劑的標(biāo)準(zhǔn)包埋流程包括三個主要步驟。

1. 將放在蔗糖溶液中的組織塊取出，放入20g L-1蔗糖與OCT包埋劑1：1體積比例混合液中，室溫浸泡2小時。
2. 移入OCT包埋劑中室溫浸泡4小時，更換新的OCT包埋劑，再室溫浸泡6小時。
3. 將標(biāo)本置于托物臺，用恒冷箱切片機(jī)切片（一般-22℃），片厚10μm，貼于預(yù)處理的載玻片上，-20℃冰箱保存。

2）快速包埋方法

Absin則提供了更為快捷的包埋方法：

1. 將組織塊平放于包埋盒內(nèi)，加入適量包埋劑浸沒組織。
2. 將包埋盒緩慢平放入盛有液氮的容器內(nèi)，當(dāng)包埋盒底部接觸液氮開始?xì)饣序v時，即保持原位切勿浸入液氮中。
3. 大約10-20秒鐘組織即迅速凍結(jié)，在組織凍結(jié)后，即可使用冰凍切片機(jī)進(jìn)行切片。

3）使用注意事項

· 使用OCT包埋劑時，需注意滴加OCT包埋劑時要均勻，盡量避免氣泡。
· 包埋時需注意切面的位置和樣本的包埋方向。剩余OCT包埋塊可做好標(biāo)記于凍存管內(nèi)-80度冷凍儲存?zhèn)溆谩?/span>
· 新鮮組織應(yīng)在切除組織后的30分鐘內(nèi)進(jìn)行OCT包埋制作冰凍切片。
· 對于不能及時處理的組織，可液氮速凍后-80度保存或經(jīng)固定液固定后蔗糖脫水再進(jìn)行OCT包埋。

廣泛應(yīng)用：OCT包埋劑的實驗場景

OCT包埋劑最初是為冰凍切片而開發(fā)的，但它現(xiàn)在的應(yīng)用范圍已大大擴(kuò)展。

1、免疫組化實驗與漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查

在免疫組化實驗中，OCT包埋劑是不能少的材料，因為它能保持抗原性，不影響抗體結(jié)合。漿膜腔積液（胸水、腹水、心包積液等）脫落細(xì)胞學(xué)檢查是病理科診斷惡性腫瘤的最重要方法之一。近年來，巧用OCT包埋劑可溶于水的性能，嘗試將其作為漿膜腔積液離心沉淀后細(xì)胞的支架，再經(jīng)過脫水、透明、浸蠟形成細(xì)胞塊。這種方法操作簡便，既富集了細(xì)胞，提高了惡性瘤細(xì)胞陽性檢出率，同時也有利于惡性腫瘤類型的鑒別。

2、囊壁樣組織處理

在囊壁樣組織的處理中，利用OCT包埋劑進(jìn)行冰凍切片能夠較好解決此類組織的切片問題。研究表明，使用OCT包埋劑對囊壁樣組織包埋后進(jìn)行冰凍切片，能夠快速完成切片，保持組織結(jié)構(gòu)完整，染色清晰，診斷準(zhǔn)確。

3、皮膚活檢標(biāo)本診斷

皮膚活檢標(biāo)本診斷中，使用冰凍切片直接免疫熒光法觀察切片標(biāo)本上熒光抗體染色結(jié)果作為抗原的鑒定和定位，OCT包埋劑也發(fā)揮了重要作用。

OCT包埋劑的更多潛力仍在發(fā)掘中。除了傳統(tǒng)的組織切片，研究人員已開始將其巧用于漿膜腔積液細(xì)胞塊制作，通過其水溶性作為細(xì)胞支架，再經(jīng)脫水、透明、浸蠟形成細(xì)胞塊，富集細(xì)胞，提高惡性腫瘤細(xì)胞陽性檢出率。在每一個精準(zhǔn)的診斷背后，都有這樣默默無聞的實驗支撐者。

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