膠原酶 Ⅳ型

溶組織梭菌

活性≥160 CDU/mg

膠原酶 Ⅳ型使用方法：
一、儲(chǔ)存液制備：
1、直接往100mg膠原酶內(nèi)加入100µl含鈣鎂的HBSS緩沖液，輕輕漩渦震蕩確保wan全溶解混勻。
2、根據(jù)具體批次的酶活力，用含鈣鎂的HBSS緩沖液調(diào)整酶濃度到100U/µl（1000×儲(chǔ)存液），之后用低蛋白吸附濾膜過濾除菌。
3、立即使用或?qū)?chǔ)存液根據(jù)單次用量分裝，置于-20℃避光保存。
4、使用前置于冰上融化，避免反復(fù)凍融。建議膠原酶的工作濃度范圍50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具體使用濃度請(qǐng)根據(jù)具體消化對(duì)象或參考文獻(xiàn)來調(diào)整。
二、組織分離：
1、用無菌手術(shù)dao或剪刀將組織切成3-4mm小片，之后用含鈣鎂的HBSS緩沖液清洗組織片幾次；
2、加足量含鈣鎂的HBSS緩沖液浸沒組織片，之后按照50-200U/ml用量加入適量膠原酶；
3、37℃孵育4-18h，置于水平搖床并且孵育體系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4、將消化好的細(xì)胞混合物用無菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離。
5、將過篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。
6、低速離心，吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或手動(dòng)法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測(cè)。
三、器官灌注：
1、將膠原酶加入37℃預(yù)熱含鈣鎂的HBSS緩沖液，使其濃度為50-200U/ml，或根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2、按照針對(duì)特定器官的預(yù)優(yōu)化頻率來進(jìn)行灌注；
3、將收集到的細(xì)胞/組織混合碎片用無菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離。
4、將過篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。
5、低速離心，吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或手動(dòng)法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測(cè)。

2-8℃干燥保存，可置于-20℃長期保存，2年有效。

IV型膠原酶含較低的胰mei活性，通常用于制備胰島細(xì)胞及髓系細(xì)胞。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

棕褐色或淡褐色粉末