TriiZol（總RNA抽提試劑盒）

一、樣品均漿
1、確定樣品的種類，在室溫下，根據(jù)下表進(jìn)行均漿。樣品的體積不能超過 TriiZol 的 10%。必須確保使用足夠量的 TriiZol，因?yàn)椴蛔懔康?TriiZol，會(huì)導(dǎo)致 DNA 污染 RNA。
2、（可選擇）當(dāng)含大量脂肪、蛋白、多糖或細(xì)胞外基質(zhì)（例如，肌肉、脂肪或植物的塊膠組織）的樣品制備 RNA 時(shí)，需增加離心步驟，從樣品中去除不溶解的物質(zhì)。 
注意：如果進(jìn)行 DNA 分離，不要離心。

二、相分離
1、在室溫下，將均漿液孵育 5min，允許核蛋白復(fù)合體分離； 
2、在每 1mL TriiZol 制備的均漿液中加入 0.1mLBCP（或0.2mL 氯仿）。蓋緊蓋子； 
3、劇烈震蕩試管 15sec； 
4、在室溫下孵育 2~3min； 
5、在 4℃下，12,000g 離心 15min； 
注意：裂解液分為紅色的苯fen-BCP（或氯仿層），中間層，無色的水相。RNA 保留于水相中。上層的水相大約為總體積的 50%； 
6、將試管傾斜 45°，小心吸出上層溶液，不要擾動(dòng)中間層及苯層； 
7、將上層溶液轉(zhuǎn)移至新的試管中； 

三、RNA沉淀
使用恰當(dāng)預(yù)防措施避免 RNase 污染。 
1、（可選擇）當(dāng)從小量樣品（＜106 細(xì)胞或＜10mg 組織）中沉淀 RNA 時(shí)，應(yīng)在水相中加入 5~10μg無 RNase 酶的糖原（glycogen）； 
注意：糖原（glycogen）與 RNA 共沉淀，當(dāng)其濃度≤4mg/mL 時(shí)，不抑制第一鏈的合成，不抑制PCR 反應(yīng)。 
2、在每 1mL TriiZol 均漿后，所得到的水相中加入 0.5mL 異丙醇； 
3、在室溫下孵育 10min； 
4、在 4℃下，12,000g 離心 10min； 
注意：在離心前，RNA 是不可見的，離心后，在試管底部及側(cè)壁形成膠樣沉淀。 

四、RNA 洗滌 
1、從試管中取出上清液，只剩下 RNA 沉淀； 
2、用 1mL 75%乙醇洗滌沉淀（起始為 1mL TriiZol 所得到的沉淀）； 
3、短暫渦旋，然后在 4℃下，7500g 離心 5min，其上清； 
4、在空氣中干燥 RNA 沉淀 5~10min。不要真空離心干燥沉淀。 
注意：不要讓 RNA 沉淀干燥，因?yàn)闀?huì)降低 RNA 溶解度。導(dǎo)致 RNA 的 A260/A280＜1.6。 

五、RNA 重懸 
1、用于溶解 RNA 的試管及溶液必須是無 RNase 酶的。用DEPC水重懸 RNA 沉淀，不要使 RNA 干燥，用吸頭反復(fù)吹打。如果溶解于DEPC 水，在室溫下，渦旋RNA 沉淀5~10min，也可在 50~55℃下孵育 10~15min。用100ulDEPC水溶解100-400ugRNA樣品。反復(fù)吹打使RNA溶解，在 50~55℃下孵育 10~15min。 
2、溶解的 RNA，應(yīng)保存于-70℃；

室溫保存，有效期12個(gè)月。

1、如果需要測(cè)量 RNA 的 A260/A280 的比值，建議使用 RNA 定量緩沖液對(duì)樣品稀釋后，進(jìn)行測(cè)量。
2、所有離心管，槍頭及相關(guān)溶液都必須無 RNA 酶污染。耐高溫器物可 180℃烘烤 4 小時(shí)以去除RNA 酶，其它器物去除 RNA 酶可考慮用 0.01%的 DEPC 水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用 DEPC 水配制。加 0.01% DEPC 至重蒸水或 MiliQ 級(jí)水中，處理過夜，滅菌即成 DEPC 水。
3、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總 RNA 的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因?yàn)樵诩?xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的 RNase 會(huì)被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時(shí)抽 RNA， 推薦先加入適量 TriiZol，并裂解樣品后凍存。
4、必須戴一次性手套操作，且盡量不要對(duì)著 RNA 樣品呼氣或說話，以防 RNA 酶污染。建議戴一次性口罩操作。
5、TriiZol 含有毒物質(zhì)，避免接觸皮膚或吸入。為防止濺入眼睛，請(qǐng)戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。如皮膚接觸 TriiZol，請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請(qǐng)聽取醫(yī)生意見。
6、為了您的自身安全，使用試劑前，請(qǐng)做好防護(hù)，如穿實(shí)驗(yàn)服，帶手套等。

配有無毒分相試劑，無需使用氯仿