紅細胞裂解液（10×）

        在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種，如ACK Lysis Buffer 、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey's Lysis Buffer 。紅細胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl 。
        愛必信提供的紅細胞裂解液（10X），配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞，例如鳥或禽類的紅細胞，效果不佳，裂解類似細胞時，不建議采用。該裂解液經(jīng)過濾除菌，為10X 濃縮液，使用1×紅細胞裂解液處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況。

操作步驟(僅供參考)：
注意：絕大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋紅細胞裂解液(10×)至1×使用。
自備材料：胰dan白酶，離心機，PBS，HBSS，生理鹽水或血清培養(yǎng)液。

（一）組織細胞樣本的常規(guī)操作：
1、制備細胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰dan白酶或膠原酶等消化處理，通過適當方法制備成細胞懸液，離心棄上清。
2、裂解: 加入3-5倍細胞沉淀體積的1×紅細胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解1-2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、離心：4°C，400-500g離心5min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復上述步驟2和步驟3各一次。
5、洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4°C，400-500g離心2-3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。
6、如有必要，重復上述步驟5一次，共洗滌1-2次。
7、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

（二）組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)：
1、制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰dan白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。
2、裂解：加入5倍細胞沉淀體積的1×紅細胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解1-2min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。
3、加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
4、離心：4°C，400-500g離心5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。
5、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復上述步驟2-4一次。
6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

（三）血液樣本的常規(guī)操作：
1、取新鮮抗凝血，400-500g離心5min，棄紅色上清。
2、裂解: 加入6-10倍細胞沉淀體積的1×紅細胞裂解液，輕柔吹打混勻，裂解1-5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對于鼠的血液，裂解1-2min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4-5min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。)
3、離心：4°C，400-500g離心5min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
5、洗滌: 根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4°C，400-500g離心2-3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。
6、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。
注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液體積的ACK Lysis Buffer 進行第2步操作，并在4℃裂解4-15min。對于鼠的血液，裂解4-5min已經(jīng)足夠；對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。

（四）血液樣本的快速操作(無需洗滌)：
1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×紅細胞裂解液，輕輕吹打混勻，裂解4-15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4-5min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當搖動以促進紅細胞裂解。）
2、加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。
3、400-500g離心5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4、如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不wan全，可以重復上述步驟2和步驟3一次。
5、根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

1、制備細胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。
2、后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。
3、離心步驟盡量在4℃離心機上操作。
4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心管。
5、離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。
6、如果經(jīng)過1×紅細胞裂解液處理后的樣品后續(xù)用于總RNA的提取，在處理細胞時不必使用DEPC處理的溶液，即無需在該操作中特意去除RNase。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
8、本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。