免疫印跡及免疫沉淀用裂解液

1、對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品
（1）取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?br style="box-sizing: border-box; -webkit-tap-highlight-color: transparent;"/>（2）對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1~2sec 后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。
（3）對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 5~10×105 細(xì)胞/管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。
（4）充分裂解后，10000~14000g 離心 3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子檢測(cè)等操作。
注：裂解液用量說(shuō)明：通常 6 孔板每孔細(xì)胞加100uL 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。
2、對(duì)于組織樣品
（1）取適當(dāng)量的裂解液，根據(jù)需要自行確定添加適當(dāng)?shù)囊种苿┗虿惶砑右种苿?br style="box-sizing: border-box; -webkit-tap-highlight-color: transparent;"/>（2）把組織jian切成細(xì)小的碎片。
（3）按照每 20mg 組織加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。
（如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
（4）用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
（5）充分裂解后，10000~14000g 離心 3~5min，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（6）如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

-20℃凍存，有效期12個(gè)月。

1、若頻繁使用本品，可以短期4℃保存。若不是頻繁使用本品，建議第一次使用本品的時(shí)候?qū)⒘呀庖悍盅b凍存，避免反復(fù)凍融。
2、若需添加蛋白酶或磷酸酶抑制劑，可使用我司的廣譜蛋白酶抑制劑混合物（abs9161），廣譜磷酸酶抑制劑混合物（abs9162），以及PMSF，或者自行準(zhǔn)備。
3、裂解樣品的所有步驟需在冰上或4℃進(jìn)行。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

溶液