組化筆特征，防水，熱穩(wěn)定，使試劑定位于細胞和組織切片上特定的位置，避免試劑浪費。淺藍色，容易識別，可溶解于二甲苯及二甲苯替代物，方便清除，環(huán)保，不含碳氟化合物和氯碳化合物等破壞臭氧層的物質(zhì)。組化筆使用方法，先將組織切片脫蠟水化，然后用薄紙抹去在玻片上的組織邊緣的液體，再用免疫組化筆在玻片上被檢體周圍畫圈或在組織邊緣上下各畫一條線，干燥10-15秒，之后將玻片浸在PBS耐熱性能，試驗過程中的耐熱性為120攝氏度以下。石蠟組織切片的畫圈，切片脫蠟水化，PBS沖洗，甩干PBS液，在...

雞胚提取物抗凝作用，靜脈注射木瓜蛋白酶可引起組織胺釋放，延長血凝時間，防止發(fā)生休克。從漿計中獲得的蛋白性物質(zhì)無論試管試驗或整體試驗均有顯著的抗凝作用，在抗凝劑量時(狗，2mg/kg)，對心血管及呼吸系統(tǒng)無明顯作用，大劑量對心臟有直接抑制作用。由于過敏及引起回腸痙攣，其治療應(yīng)用仍受限制。雞胚提取物蛋白酶的作用，木瓜蛋白酶，能幫助蛋白消化，可用于慢性消化不良及胃炎等。亦可用于腹腔注射防治粘連，動物試驗證明其防治粘連再發(fā)的效果比胰蛋白酶好。未成熟果實的漿汁在炭疽病灶中能消化損壞的組...

β-Tubulin即微管蛋白，是細胞的一種骨架蛋白。Tubulin分為α、β、γ、δ、ε等多種tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成異源二聚體，是形成微管的zui主要的兩種Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分別為55kDa和50kDa，其實際檢測條帶均在55kDa左右。β-tubulin抗體被廣泛用于WesternBlotting時上樣量是否一致的參照，也常被用于免疫染色觀察細胞的微管結(jié)構(gòu)。β-Tubulin抗體的英文別名...

Marker，染色及內(nèi)參等相關(guān)問題Q：用的是預(yù)染marker，但是電泳總跑不全8條帶，請問什么原因？怎樣改善？膠用過8％，10％，12％，都是這樣。marker是新買的。A：一般來說，是小分子量Marker跑走了，可以增加膠濃度或減少電泳時間。梯度膠也是不錯的選擇。（梯度凝膠愛必信就可提供呦）Q：WesternBlot哪種染色好？A：（1）陰離子染料是zui常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測極限可達到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅S...

針對抗體常見問題Q：做細胞信號傳導(dǎo)，要做磷酸化某因子WesternBlot，其二抗有何要求？A：對二抗有無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標(biāo)記的二抗。Q：免疫組化和WesternBlot可以用同一種抗體嗎？A：免疫組化時抗體識別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱表位），有些表位是線性的，而有的屬于構(gòu)象型；線性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會消失。如果你所用的抗體識別的是蛋白上連續(xù)的幾個氨基酸，也就是線...

針對樣品的常見問題：Q：細胞水平要做WesternBlot，多少細胞提的蛋白夠WesternBlot？A：一般地5*106就足夠了。Q:同一樣品能同時提RNA又提蛋白嗎，這樣對WesternBlot有無影響?A：能，沒有問題的。Q:同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的WesternBlot檢測嗎？A：當(dāng)然可以，有的甚至可以同時測幾十種樣品。Q:如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？A:如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑就要溫和得多，這時建議加上NaF去抑制磷酸化酶...

Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。我們將通過以下幾個方面來詳細地介紹一下WesternBlot技術(shù)：【原理】與Southern或Northern雜交方法類似，但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如PVDF膜）上...

預(yù)染蛋白marker是WesternBlot實驗中常用的一種試劑，那么預(yù)染蛋白marker到底是什么？用的時候又有哪些注意事項呢？預(yù)染蛋白marker其實就是一些純化好的蛋白混合物，通過與染料共價耦聯(lián)，在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預(yù)染蛋白marker的出現(xiàn)方便了我們的實驗，可以幫助我們在電泳時、電泳后，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率。比如使用垂直電泳時*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處，我們使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測電泳的進程。當(dāng)目標(biāo)蛋白進入*分辨區(qū)時就可以停止電...